মানকিপক্স ভাইরাস রিয়েল টাইম পিসিআর কিট
পণ্যের বিবরণ
উদ্দেশ্যে ব্যবহার
এটি রিয়েল টাইম পিসিআর সিস্টেম ব্যবহার করে মানুষের সিরাম বা ক্ষত এক্সিউডেট নমুনায় মাঙ্কিপক্স ভাইরাস সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়।
পরীক্ষার নীতি
এই পণ্যটি একটি ফ্লুরোসেন্ট প্রোব-ভিত্তিক Taqman® রিয়েল-টাইম PCR অ্যাস সিস্টেম।নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং প্রোবগুলি মাঙ্কিপক্স ভাইরাসের F3L জিন সনাক্তকরণের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।মানব সংরক্ষিত জিনকে লক্ষ্য করে অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ মিথ্যা-নেতিবাচক ফলাফল এড়াতে নমুনা সংগ্রহ, নমুনা পরিচালনা এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর প্রক্রিয়া পর্যবেক্ষণ করে।কিটটি একটি সম্পূর্ণ প্রিমিক্স লাইওফিলাইজড সিস্টেম, যার মধ্যে রয়েছে মানকিপক্স ভাইরাস সনাক্তকরণের জন্য প্রয়োজনীয় উপকরণ: নিউক্লিক অ্যাসিড পরিবর্ধন এনজাইম, ইউডিজি এনজাইম, প্রতিক্রিয়া বাফার, নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং প্রোব।
প্রধান বিষয়বস্তু
প্রদত্ত উপাদানগুলি টেবিলে তালিকাভুক্ত করা হয়েছে।
| উপাদান | প্যাকেজ | উপাদান |
| মাঙ্কিপক্স ভাইরাসলাইওফিলাইজড প্রিমিক্স | 8 স্ট্রিপ পিসিআর টিউব× 6 পাউচ | প্রাইমার, প্রোব, dNTP/dUTP মিক্স, Mg2+, Taq DNA পলিমারেজ, UDG এনজাইম |
| এমপিভি পজিটিভ কন্ট্রোল | 400 μL×1 টিউব | টার্গেট জিন ধারণকারী ডিএনএ সিকোয়েন্স |
| MPV নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ | 400 μL×1 টিউব | মানুষের জিন সেগমেন্ট ধারণকারী ডিএনএ ক্রম |
| দ্রবীভূত সমাধান | 1 মিলি × 1 টিউব | স্টেবিলাইজার |
| সাদৃশ্য সার্টিফিকেট | 1 টুকরা | / |
অপারেশন ফ্লো
1. নমুনাসংগ্রহ:নমুনা অনুযায়ী জীবাণুমুক্ত টিউব মধ্যে সংগ্রহ করা উচিত
মান প্রযুক্তিগত বৈশিষ্ট্য সঙ্গে.
2. রিএজেন্ট প্রিপারেশন (রিএজেন্ট প্রিপারেশন এরিয়া)
কিটের উপাদানগুলি বের করুন, স্ট্যান্ডবাই ব্যবহারের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় ভারসাম্য রাখুন।
3. নমুনা প্রক্রিয়াকরণ (নমুনা প্রক্রিয়াকরণ এলাকা)
3.1 নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন
ভাইরাল ডিএনএ নিষ্কাশন কিটগুলির সংশ্লিষ্ট প্রয়োজনীয়তা এবং পদ্ধতি অনুসারে নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের জন্য 200μL তরল নমুনা, ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ নেওয়ার সুপারিশ করা হয়।
3.2 Lyophilized পাউডার দ্রবীভূত এবং টেমপ্লেট যোগ
নমুনার সংখ্যা অনুযায়ী মানকিপক্স ভাইরাস লাইওফিলাইজড প্রিমিক্স প্রস্তুত করুন।একটি নমুনার জন্য একটি পিসিআর টিউব প্রয়োজন যাতে লাইওফিলাইজড প্রিমিক্স পাউডার থাকে।নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ দুটি নমুনা হিসাবে বিবেচনা করা উচিত।
(1) Lyophilized প্রিমিক্স ধারণকারী প্রতিটি PCR টিউবে 15μL দ্রবীভূত সমাধান যোগ করুন, তারপর প্রতিটি PCR টিউবে যথাক্রমে 5μL নিষ্কাশিত নমুনা/ নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ/ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ যোগ করুন।
(2) পিসিআর টিউবগুলিকে শক্তভাবে ঢেকে রাখুন, লাইওফিলাইজড পাউডার সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত এবং মিশ্রিত না হওয়া পর্যন্ত পিসিআর টিউবগুলিকে হাত দিয়ে ঝাঁকান, তাত্ক্ষণিক কম-গতির সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে পিসিআর টিউবের নীচে তরল সংগ্রহ করুন।
(3) যদি সনাক্তকরণের জন্য সাধারণ রিয়েল-টাইম পিসিআর যন্ত্র ব্যবহার করা হয়, তাহলে সরাসরি পিসিআর টিউবগুলিকে পরিবর্ধন এলাকায় স্থানান্তর করুন;যদি সনাক্তকরণের জন্য BTK-8 ব্যবহার করা হয়, তাহলে নিম্নলিখিত ক্রিয়াকলাপগুলি সম্পাদন করতে হবে: PCR টিউব থেকে BTK-8 এর প্রতিক্রিয়া চিপ কূপে 10 μL তরল স্থানান্তর করুন।একটি পিসিআর টিউব চিপের একটি কূপের সাথে মিলে যায়।পাইপেটিং অপারেশনের সময়, নিশ্চিত করুন যে পাইপেটটি 90 ডিগ্রি উল্লম্ব।অ্যারোসোল বাধা পিপেটের টিপগুলি কূপের মাঝখানে মাঝারি শক্তির সাথে স্থাপন করা উচিত এবং যখন এটি প্রথম গিয়ারে পৌঁছায় (বুদবুদ এড়াতে) তখন পাইপেটটিকে ধাক্কা দেওয়া বন্ধ করুন।কূপগুলি ভরাট হওয়ার পরে, সমস্ত কূপগুলিকে ঢেকে রাখার জন্য একটি প্রতিক্রিয়া চিপ ঝিল্লি বের করুন এবং চিপটি তখন পরিবর্ধন সনাক্তকরণ এলাকায় স্থানান্তরিত হয়।
4. পিসিআর পরিবর্ধন (সনাক্তকরণ এলাকা)
4.1 প্রতিক্রিয়া ট্যাঙ্কে পিসিআর টিউব/প্রতিক্রিয়া চিপ রাখুন এবং প্রতিটি প্রতিক্রিয়ার নাম অনুরূপ ক্রমে ভালভাবে সেট করুন।
4.2 সনাক্তকরণ ফ্লুরোসেন্স সেটিংস: (1) Monkeypox ভাইরাস (FAM);(2) অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ (CY5)।
4.3 নিম্নলিখিত সাইক্লিং প্রোটোকল চালান
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio-এর প্রোটোকল:
| ধাপ | তাপমাত্রা | সময় | সাইকেল | |
| 1 | প্রি-ডেনেচুরেশন | 95℃ | 2 মিনিট | 1 |
| 2 | বিকৃতকরণ | 95℃ | 10 সে | 45 |
| অ্যানিলিং, এক্সটেনশন, ফ্লুরোসেন্স অধিগ্রহণ | 60℃ | 30 সে | ||
BTK-8 এর প্রোটোকল:
| ধাপ | তাপমাত্রা | সময় | সাইকেল | |
| 1 | প্রি-ডেনেচুরেশন | 95℃ | 2 মিনিট | 1 |
| 2 | বিকৃতকরণ | 95℃ | 5 সে | 45 |
| অ্যানিলিং, এক্সটেনশন, ফ্লুরোসেন্স অধিগ্রহণ | 60℃ | 14 সে | ||
5. ফলাফল বিশ্লেষণ (অনুগ্রহ করে ইন্সট্রুমেন্ট ইউজার ম্যানুয়াল দেখুন)
প্রতিক্রিয়া পরে, ফলাফল স্বয়ংক্রিয়ভাবে সংরক্ষণ করা হবে.বিশ্লেষণ করতে "বিশ্লেষণ করুন" এ ক্লিক করুন এবং যন্ত্র স্বয়ংক্রিয়ভাবে ফলাফল কলামে প্রতিটি নমুনার Ct মান ব্যাখ্যা করবে।নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের ফলাফল নিম্নলিখিত "6. গুণমান নিয়ন্ত্রণ" এর সাথে সঙ্গতিপূর্ণ হবে৷
6. মান নিয়ন্ত্রণ
6.1 নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: FAM চ্যানেলে Ct বা Ct>40 নেই, CY5 চ্যানেলে Ct≤40 স্বাভাবিক পরিবর্ধন বক্ররেখা সহ।
6.2 ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: সাধারণ পরিবর্ধন বক্ররেখা সহ FAM চ্যানেলে Ct≤35, CY5 চ্যানেলে সাধারণ পরিবর্ধন বক্ররেখা সহ Ct≤40।
6.3 উপরের সমস্ত মানদণ্ড পূরণ হলে ফলাফলটি বৈধ।অন্যথায়, ফলাফল অবৈধ।
ফলাফল ব্যাখ্যা
নিম্নলিখিত ফলাফল সম্ভব:
| FAM চ্যানেলের Ct মান | CY5 চ্যানেলের Ct মান | ব্যাখ্যা | |
| 1# | Ct বা Ct>40 নেই | ≤40 | মাঙ্কিপক্স ভাইরাস নেতিবাচক |
| 2# | ≤40 | যেকোনো ফলাফল | মাঙ্কিপক্স ভাইরাস পজিটিভ |
| 3# | 40-45 | ≤40 | পুনরায় পরীক্ষা;যদি এটি এখনও 40~45 হয়, তাহলে 1# হিসাবে রিপোর্ট করুন |
| 4# | Ct বা Ct>40 নেই | Ct বা Ct>40 নেই | অবৈধ |
বিঃদ্রঃ: অবৈধ ফলাফল দেখা দিলে, নমুনা সংগ্রহ করে আবার পরীক্ষা করতে হবে।
আদেশ তথ্য
| পণ্যের নাম | বিড়ালনা | আকার | নমুনা | শেলফ লাইফ | ট্রান্স& Sto.টেম্প |
| মানকিপক্স ভাইরাস রিয়েল টাইম পিসিআর কিট | B001P-01 | 48টি পরীক্ষা/কিট | সিরাম / ক্ষত এক্সিউডেট | 1 ২ মাস | -25～-15℃ |
